单克隆抗体制备

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杂种细胞生成

b细胞克隆

抗体的纯化和鉴定

与多克隆抗体不同,单克隆抗体针对抗原上的单个表位, 哪些是针对抗原不同表位的抗体混合物. 单克隆抗体的这种特异性使研究人员能够探测该表位,即使该表位的变化非常微妙——有时小到一个氨基酸的变化. 单克隆抗体的一个主要优势是它们来自杂交瘤细胞或重组细胞系, 这种具有相同特异性和结构的抗体将有无限的供应.

Labcorp使用两种不同的技术来产生单克隆抗体:杂交瘤和b细胞克隆. 用于杂交瘤技术, 当检测到足够的免疫反应时,对啮齿动物进行抗原免疫, 抗体产生细胞与骨髓瘤细胞系融合并进行筛选. 另外, 在b细胞克隆中, 筛选免疫动物脾细胞,从选定的b细胞中克隆和表达重链和轻链基因. 这两种技术都提供了产生几乎无限的具有相同特性的抗体的机会.

杂种细胞生成

  • 啮齿动物宿主种类
  • 用于融合的脾细胞和/或淋巴结
  • 各种融合程序,如聚乙二醇(PEG)或电融合

b细胞克隆

  •  几乎所有的宿主物种
  • 用FACS分离抗原特异性b细胞
  • 重链和轻链基因的克隆
  • 在哺乳动物载体中的表达和稳定的细胞生成

抗体的纯化和鉴定

  • 扩大:
    •  腹水或 在体外 方法
    • 支原体检测,同型
  • 杂交瘤细胞系的细胞库/储存
  • 哺乳动物载体的瞬时转染